Цусны шууд ПГУ -ын иж бүрдэл

Цусыг олборлохгүйгээр загвар болгон шууд ашиглан зорилтот генийг хурдан олшруулах.

Энэхүү иж бүрдэл нь хүний геном дахь нэг хуулбарласан генийг үр дүнтэйгээр нэмэгдүүлэхийн тулд генийн инженерчлэлтэй дарангуйлагчийн эсрэг ДНХ полимеразыг ашигладаг. Энэхүү иж бүрдэл дэх сайн оновчтой буфер систем нь полимеразыг ПГУ -ын дарангуйлагчийг дарангуйлахад хүчтэй эсэргүүцдэг тул цус, өсгөвөрлөсөн эсүүдийг загвар болгон ашиглан ДНХ -ийг шууд өсгөж чаддаг. Энэ бүтээгдэхүүнийг ажиллуулахад хялбар бөгөөд ДНХ цэвэрлэх, дээжийг урьдчилан боловсруулах зэрэг нарийн төвөгтэй алхамуудыг шаарддаггүй.
Энэхүү иж бүрдлийг 2 × MasterMix хэлбэрээр өгсөн бөгөөд цусны загвар болон харгалзах илрүүлэх праймерыг нэмснээр урвалыг хийж болно. Үүнийг хүн, хулгана, гахай, үхэр болон бусад зүйлийн хөхтөн амьтдын өсгөвөрлөсөн эсүүдэд, түүнчлэн шинэ буюу 4 хэмийн хадгалалттай бүтэн цус, антикоагулянт (EDTA, цитрат, гепарин), шингэрүүлсэн цусны бүлэгнэл, хуурай цусны толбо зэрэгт түрхэж болно. Whatman 903 ба FTA Elute арилжааны картууд дээр хадгалагддаг.

Муур. Үгүй	Сав баглаа боодлын хэмжээ
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Бидэнд имэйл илгээнэ үү

Бүтээгдэхүүний дэлгэрэнгүй

Туршилтын жишээ

FAQ

Бүтээгдэхүүний шошго

Онцлог шинж чанарууд

■ Энгийн бөгөөд хурдан: ПГУ -ын олшруулалтыг дээж бэлтгэх, ДНХ -ийг гаргаж авахад төвөгтэй алхам хийхгүйгээр цусыг загвар болгон шууд хийж болно.
■ Өндөр цэвэршилт: Дээжийг урьдчилан эмчлэх болон ДНХ-ийг ялган авах үе шатыг алгасах нь дээжийг хөндлөн бохирдохоос сэргийлнэ.
■ Өндөр хүчин чадал: Том хэмжээтэй дээж авах ПГУ-ын таних ажлыг 96/384 худагтай ПГУ-ын хавтангаар хослуулан хийж болно.
■ Хүчирхэг түгээмэл байдал: Энэхүү иж бүрдэл нь өндөр GC фрагмент эсвэл нарийн төвөгтэй хоёрдогч бүтэцтэй хэсгүүдийг үр дүнтэйгээр нэмэгдүүлэх боломжтой бөгөөд олшруулалтын урт нь 5 кб хүртэл байж болно.
■ Хүчтэй стресст тэсвэртэй байдал: Энэхүү иж бүрдлийг янз бүрийн зүйл, цусны дээжийг янз бүрийн аргаар хадгалж болно.

Програмууд

Энэхүү иж бүрдэлд багтсан ПГУ-ын бүтээгдэхүүнүүд нь 3'-төгсгөлд “А” -г агуулдаг бөгөөд үүнийг ТТ вектор клончлоход шууд ашиглаж болно. Энэхүү иж бүрдлийг ДНХ-ийн геномын фрагментийг олшруулах, өндөр хүчин чадалтай генетикийн шинжилгээ, генотипийн шинжилгээ (ген илрүүлэх гэх мэт) шинжилгээнд ашиглаж болно.

Бүх бүтээгдэхүүнийг ODM/OEM -д тохируулж болно. Дэлгэрэнгүй мэдээллийг,Customized Service (ODM/OEM) дээр дарна уу.

Өмнөх: TIANcombi DNA Lyse & Det ПГУ -ын иж бүрдэл

Дараачийн: Хулганы эдийн шууд ПГУ -ын иж бүрдэл

	Хүний EDTA антикоагулянтыг загвар болгон ашиглан GC -ийн өөр өөр агууламжтай 4 генийг Цусны шууд ПГУ -ын иж бүрдэлээр олшруулсан. ПГУ -ын урвалын систем нь 20 мкл бөгөөд 1 мкл цусыг загвар болгон ашигласан. М: TIANGEN Marker II; 1: Хэсгийн хэмжээ 1090 bp, GC -ийн агууламж 68.1%; 2: Хэсгийн хэмжээ 1915 bp, GC -ийн агуулга 70.4%; 3: Хэсгийн хэмжээ 448 bp, GC -ийн агууламж 74.8%; 4: Хэсгийн хэмжээ 1527 bp, GC -ийн агуулга 61.5%. Туршилтын үр дүн: Цусны шууд ПГУ-ын иж бүрдэл нь ДНХ-ийн фрагментийг GC-ийн агууламжтай 61.5%-74.8%-ийн хооронд үр дүнтэй олшруулж чаддаг бөгөөд энэ нь GC-ийн өндөр хэсгүүдийг нэмэгдүүлэх чадвартай болохыг харуулж байна.
	Хүний EDTA антикоагулянтыг загвар болгон ашиглан өөр өөр урттай 5 генийг (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 ба Hn4.0) Цусны шууд ПГУ -ын иж бүрдэлээр олшруулсан. ПГУ -ын урвалын систем нь 20 мкл бөгөөд 1 мкл цусыг загвар болгон ашигласан. М: TIANGEN Marker II; 1-3: 3 өөр цусны дээж; NTC: праймергүй хяналт. Туршилтын үр дүн: Цусны шууд ПГУ -ын иж бүрдэл нь 4 кб хүртэл урттай фрагментүүдийг олшруулж чаддаг бөгөөд энэ нь урт фрагментийг олшруулах чадвартайг харуулж байна.
	Хүний EDTA антикоагулянтыг загвар болгон ашиглаж, цусны янз бүрийн дээжийг ПГУ -аар илрүүлэхийн тулд Blood Direct PCR Kit -ийг ашигласан. ПГУ -ын урвалын систем нь 20 мкл бөгөөд 1 мкл цусыг загвар болгон ашигласан. М: TIANGEN Marker II; 1-9: цусны ачааллын хэмжээ 0.1 мкл, 0.2 мкл, 0.3 мкл, 0.4 мкл, 1 мкл, 2 мкл, 3 мкл, 4 мкл, 5 мкл; NTC: загваргүй хяналт Туршилтын үр дүн: Цусны шууд ПГУ-ын иж бүрдэл нь цусны хүчтэй эсэргүүцэлтэй бөгөөд 0.1-5 мкл-ийн ачааллын хүрээтэй цусны дээжийг нэмэгдүүлэх чадвартай.
	Загвар болгон янз бүрийн эмчилгээ хийдэг хүн, харх, тахиа болон бусад зүйлийн цусны дээжийг ашигласан болно. Цусны шууд ПГУ-ын иж бүрдлийг PRNP (хүн, 750 цохилт), Актин (харх, 200 цохилт), β-Актин (Тахианы мах, 1.0 кб) олшруулахад ашигласан. ПГУ -ын урвалын систем нь 20 мкл бөгөөд 1 мкл цусыг загвар болгон ашигласан. М: TIANGEN Маркер II. Туршилтын үр дүн: Цусны шууд ПГУ -ын иж бүрдлийг олон төрлийн дээжинд хэрэглэж болох бөгөөд янз бүрийн эмчилгээнд хамрагдсан төрөл бүрийн цусны дээж дээр ПГУ -ын шууд илрүүлэлтийг хийж болно.

А: Олшруулах хамтлаг байхгүй

A-1 загвар

■ Загвар нь уургийн хольц эсвэл Taq дарангуйлагч гэх мэтийг агуулдаг - ДНХ -ийн загварыг цэвэрлэж, уургийн хольцыг арилгаж эсвэл ДНХ -ийн загварыг цэвэршүүлэх хэрэгслээр гаргаж авна.

■ Загварын денатура нь дуусаагүй байна - —Денатурацийн температурыг зохих ёсоор нэмэгдүүлж, денатурацийн хугацааг уртасгана.

■ Загварын доройтол —- Загварыг дахин бэлдэх.

А-2 праймер

■ Праймерын чанар муу —— Праймерыг дахин нийлэгжүүлнэ.

■ Праймерын доройтол - Хадгалалт хийхийн тулд өндөр концентрацитай праймерыг бага хэмжээгээр хуваана. Олон удаа хөлдөх, гэсэхээс зайлсхийх, эсвэл 4 ° C-ийн температурт удаан хадгалах.

■ Праймерын зохисгүй дизайн (жишээлбэл, праймерын урт хангалтгүй, праймерын хооронд бүдгэрүүлэгч бий болсон гэх мэт) -Дахин дизайн хийх праймер (праймер болон хоёрдогч бүтэц үүсэхээс зайлсхийх)

А-3 мг²⁺төвлөрөл

■ Мг²⁺ концентраци хэт бага - Мг -ийг тогтмол нэмэгдүүлэх²⁺концентраци: Mg -ийг оновчтой болгох²⁺ оновчтой Mg -ийг тодорхойлохын тулд 0.5мМ -ийн интервалтай 1мМ -ээс 3мМ хүртэлх урвалын цувралаар концентраци²⁺ загвар ба праймер бүрийн концентраци.

A-4 Шатаах температур

■ Өндөр халаах температур нь праймер ба загварыг холбоход нөлөөлдөг. —- Зуурах температурыг бууруулж, нөхцлийг 2 ° C градиентээр оновчтой болгоно.

A-5 Сунгах хугацаа

■ Богино сунгалтын хугацаа —— Сунгах хугацааг нэмэгдүүлэх.

Асуулт: Хуурамч эерэг

Үзэгдэл: Сөрөг дээжүүд нь зорилтот дарааллын зурвасуудыг харуулдаг.

А-1 ПГУ-ын бохирдол

■ Зорилтот дараалал эсвэл олшруулах бүтээгдэхүүний хөндлөн бохирдол - Зорилтот дарааллыг агуулсан дээжийг сөрөг дээжинд пипеткээр оруулахгүй байх, эсвэл центрифугийн хоолойноос асгахгүй байх. Одоо байгаа нуклейн хүчлийг устгахын тулд урвалж буюу тоног төхөөрөмжийг автоклавт хийж, сөрөг нөлөөллийн туршилтаар бохирдол байгаа эсэхийг тодорхойлох шаардлагатай.

■ Урвалжийн бохирдол - Урвалжуудыг олшруулж, бага температурт хадгална.

A-2 Primer

■ Мг²⁺ концентраци хэт бага - Мг -ийг тогтмол нэмэгдүүлэх²⁺ концентраци: Mg -ийг оновчтой болгох²⁺ оновчтой Mg -ийг тодорхойлохын тулд 0.5мМ -ийн интервалтай 1мМ -ээс 3мМ хүртэлх урвалын цувралаар концентраци²⁺ загвар ба праймер бүрийн концентраци.

■ Праймерын зохисгүй дизайн, зорилтот дараалал нь зорилтот бус дараалалтай ижил төстэй шинж чанартай байдаг. —- Дахин дизайн хийх праймер.

А: Тодорхой бус олшруулалт

Үзэгдлүүд: ПГУ-ын олшруулалтын зурвас нь хүлээгдэж буй хэмжээтэй нийцэхгүй байна, том эсвэл жижиг, эсвэл заримдаа тусгай өсгөлтийн болон өвөрмөц бус өсгөлтийн зурвас хоёулаа тохиолддог.

A-1 праймер

■ Праймерын өвөрмөц чанар муу

—- Дахин дизайн хийх праймер.

■ Праймерын концентраци хэт өндөр - денатурацийн температурыг зохих ёсоор нэмэгдүүлж, денатурацийн хугацааг уртасгадаг.

А-2 мг²⁺ төвлөрөл

■ Мг²⁺ концентраци хэт өндөр —— Mg2+ концентрацийг зохих ёсоор бууруулна: Mg -ийг оновчтой болгоно²⁺ оновчтой Mg -ийг тодорхойлохын тулд 0.5мМ -ийн интервалтай 1мМ -ээс 3мМ хүртэлх урвалын цувралаар концентраци²⁺ загвар ба праймер бүрийн концентраци.

А-3 Дулаан тэсвэртэй полимераза

■ Ферментийн хэт их хэмжээ - ферментийн хэмжээг 0.5 U интервалтайгаар зохих хэмжээгээр бууруулна.

A-4 Шатаах температур

■ Нэвчилтийн температур хэт бага байна.

А-5 ПГУ-ын мөчлөг

■ ПГУ -ын хэт олон мөчлөг - ПГУ -ын мөчлөгийн тоог багасгах.

Асуулт: Толбо эсвэл түрхэц

A-1 праймер—— Муу чанар-Праймерын загварыг дахин боловсруулж, өвөрмөц байдлыг нь сайжруулахын тулд праймерын байрлал, уртыг өөрчлөх; эсвэл үүрлэсэн ПГУ хийх.

А-2 загвар ДНХ

—– Загвар нь цэвэр биш - Загварыг цэвэрлэж эсвэл ДНХ -ийг цэвэрлэх хэрэгслээр гаргаж авна.

А-3 мг²⁺ төвлөрөл

—-Мг²⁺ концентраци хэт өндөр - Мг -ийг тогтмол бууруулдаг²⁺ концентраци: Mg -ийг оновчтой болгох²⁺ оновчтой Mg -ийг тодорхойлохын тулд 0.5мМ -ийн интервалтай 1мМ -ээс 3мМ хүртэлх урвалын цувралаар концентраци²⁺ загвар ба праймер бүрийн концентраци.

A-4 dNTP

—DNTP -ийн концентраци хэт өндөр байна - dNTP -ийн концентрацийг зохих ёсоор бууруулна

A-5 Шатаах температур

—- Зуухлах температур маш бага ——Нухах температурыг зохих ёсоор нэмэгдүүлэх

А-6 мөчлөг

——Хэт олон мөчлөг ——Циклийн тоог оновчтой болгох

А: 50 мкл ПГУ -ын урвалын системд ДНХ -ийн загварыг хэр их хэмжээгээр нэмэх ёстой вэ?

Асуулт: Урт хэсгүүдийг хэрхэн яаж өсгөх вэ?

Эхний алхам бол тохиромжтой полимеразыг сонгох явдал юм. Тогтмол Taq полимераз нь 3'-5 'экзонуклеазын идэвх дутагдсаны улмаас шалгаж унших боломжгүй бөгөөд үл нийцэх байдал нь фрагментийн суналтын үр ашгийг ихээхэн бууруулдаг. Тиймээс ердийн Taq полимераз нь 5 кб -аас том хэмжээтэй зорилтот хэсгүүдийг үр дүнтэй өсгөж чадахгүй. Өргөтгөлийн үр ашгийг дээшлүүлэх, урт фрагментийг олшруулах хэрэгцээг хангахын тулд тусгай өөрчлөлттэй эсвэл өөр өндөр чанартай полимераз бүхий так полимеразыг сонгох шаардлагатай. Нэмж дурдахад урт фрагментийг олшруулахын тулд праймерын дизайн, денатурацийн хугацаа, сунгах хугацаа, буфер рН гэх мэтийг тохируулах шаардлагатай байдаг. Ихэвчлэн 18-24 даралттай праймер нь илүү сайн ургац авахад хүргэдэг. Загварын эвдрэлээс урьдчилан сэргийлэхийн тулд 94 ° C температурт денатурацийн хугацааг нэг мөчлөгт 30 секунд буюу түүнээс бага болгож, олшруулахаас өмнө температурыг 94 ° C хүртэл нэмэгдүүлэх хугацааг 1 минутаас бага байх ёстой. Түүгээр ч үл барам температурыг ойролцоогоор 68 0С -т тохируулж, сунгах хугацааг 1 кб/мин -ийн хурдаар төлөвлөх нь урт хэсгүүдийг үр дүнтэй олшруулах боломжийг олгодог.

А: ПГУ -ын олшруулалтын үнэнч байдлыг хэрхэн сайжруулах вэ?

ПГУ -ын олшруулалтын алдааны түвшинг өндөр нарийвчлалтай янз бүрийн ДНХ полимеразын тусламжтайгаар бууруулж болно. Одоогоор олсон бүх Taq DNA полимеразуудын дотроос Pfu фермент хамгийн бага алдааны түвшинтэй, хамгийн өндөр үнэнч байдаг (хавсаргасан хүснэгтийг үзнэ үү). Ферментийн сонголтоос гадна судлаачид урвалын нөхцлийг оновчтой болгох замаар ПГУ -ын мутацийн түвшинг бууруулах боломжтой бөгөөд үүнд буферийн найрлага, термостабол полимеразын концентраци, ПГУ -ын мөчлөгийн тоог оновчтой болгох зэрэг орно.

Энд зурвасаа бичээд бидэнд илгээнэ үү

Бүтээгдэхүүний ангилал

ЯАГААД БИДНИЙГ СОНГОХ ВЭ

Манай үйлдвэр байгуулагдсанаасаа хойш энэхүү зарчмыг баримталж дэлхийн жишигт нийцсэн бүтээгдэхүүн үйлдвэрлэж байна
эхлээд чанарын. Манай бүтээгдэхүүнүүд нь салбартаа маш сайн нэр хүндтэй болж, хуучин болон хуучин хэрэглэгчдийн дунд үнэ цэнэтэй болсон.

ЛАВЛАХ