2 × Taq Платинум ПГУ -ын холимог
Үйл ажиллагааны тодорхойлолт
1 нэгж (U) Taq Платинум ДНХ Полимеразын идэвхжилтийг идэвхжүүлсэн хулд эр бэлгийн эсийн ДНХ-ийг загвар/праймер болгон 30 минутын дотор хүчилд уусдаггүй бодисуудад 10 нмоль дезоксинуклеотидыг шингээхэд шаардлагатай ферментийн хэмжээг тодорхойлно.
Чанарын шалгалт
SDS-PAGE илрүүлэлтийн цэвэр байдал 99%-иас дээш; Гадны нуклеазын идэвхжил илрээгүй; Хүний геном дахь дан хуулбартай генийг үр дүнтэйгээр нэмэгдүүлэх боломжтой; Тасалгааны температурт нэг долоо хоног хадгалахад үйл ажиллагааны хувьд мэдэгдэхүйц өөрчлөлт гардаггүй.
Техникийн үндсэн үзүүлэлтүүд
Энэ нь 5’-3 ′ экзонуклеазын идэвх, 3’-5 ′ экзонуклеазын идэвхжилтэй бөгөөд үнэнч байдал нь Пфу полимеразын дэргэд байдаг. Taq Platinum Polymerase -ийн сунгах хурд нь Pfu полимеразаас хурдан бөгөөд олшруулалтын үр ашиг өндөр байдаг. ПГУ -ын бүтээгдэхүүнийг мохоо төгсгөлд шууд холбож эсвэл ТТ вектороор клон хийж болно. Хэрэв хувилах үр ашгийг дээшлүүлэх шаардлагатай бол ТТ вектор руу клон хийхээс өмнө эхлээд цэвэрлэж, 3'-dA overhangs нэмэхийг зөвлөж байна.
Нэг хоолойтой Taq Platinum MasterMix (Өндөр технологийн үндэсний бүтээгдэхүүний баталгаажуулалт)
■ Taq Platinum MasterMix нь ПГУ -ын урвалын өвөрмөц байдал, мэдрэмжийг сайжруулж, GC -ийн өндөр агуулга, хоёрдогч бүтэц гэх мэт нарийн төвөгтэй загваруудыг олшруулж чаддаг. Туршилтын үр дүнг илүү нарийвчлалтай болгохын тулд зорилтот загварыг 2 хуулбар болгон олшруулж болно.
■ Өвөрмөц Taq Platinum MasterMix томъёо нь урвалын системийг бүхэлд нь тогтвортой байлгадаг бөгөөд 4 ° C-д дахин хөлдөх, гэсэх, удаан хугацаагаар хадгалах нь үйл ажиллагаанд нөлөөлөхгүй.
■ Тогтвортой, үр дүнтэй урьдчилан бэлтгэсэн ПГУ-ын холимог шийдэл нь ажлыг хурдан бөгөөд хялбар болгож, хөдөлмөрийн эрч хүч, дээж авах алдааг эрс багасгадаг. Өндөр үзүүлэлттэй ПГУ-ын сайжруулагч ба оновчлогчийг мөн энэхүү хольцонд оруулсан бөгөөд энэ нь ПГУ-ын нөхцлийн шаардлагыг бууруулдаг.
■ Энэ бүтээгдэхүүн нь будаг агуулсан болон будаггүй системтэй. Будаг агуулсан MasterMix бүтээгдэхүүнийг ПГУ-ын дараа ачаалах буфер нэмэлгүйгээр шууд электрофоржиж болно.
Програмууд
Энэ нь геном гэх мэт нарийн төвөгтэй загваруудаас өндөр нарийвчлалтай бүтээгдэхүүнийг олшруулахын тулд Pfu полимеразыг орлох боломжтой бөгөөд энэ нь экспресс генийг клончлох, сайтын онцлог мутаци, дан нуклеотидын полиморфизм (SNP) гэх мэт анализ хийхэд тохиромжтой.
ПГУ -ын праймерыг боловсруулахдаа анхаарах зүйлс:
Праймерын урт нь ихэвчлэн 20-25 мер байдаг. Гэсэн хэдий ч урт ПГУ-ыг хийхдээ праймерын уртыг 30-35 мер хүртэл нэмэгдүүлэх шаардлагатай.
■ Хоёр праймерын хооронд нэмэлт хослол байхгүй, ялангуяа 3 -ийн төгсгөлд байгаа сүүлийн 3 суурийн хувьд.
■ GC-ийн агууламж 50-60%байх ёстой бөгөөд орон нутгийн баялаг GC эсвэл AT-ээс зайлсхийх хэрэгтэй. Праймер ба загварыг тогтвортой холбохын тулд 3 -ийн төгсгөлд AT -ийн баялаг бүтцээс зайлсхий.
■ Хоёрдогч бүтэц үүсгэхийн тулд праймераас зайлсхий.
■ Tm температуртай хоёр праймерыг хоорондоо ойрхон сонгоно уу.
ПГУ -ын праймеруудын Tm утгыг тооцоолох:
■ Праймер 20 -оос бага бол: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ Праймер нь 20-оос дээш бол: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, энд L нь праймерын урт юм.
■ Нэвчилтийн температурыг (Tm-5) ° C-д тохируулна.
ПГУ -ын праймер оролт
Праймерын зохих эцсийн концентрацийг 0.1 мкм -ээс 1.0 мкм -ийн хооронд сонгож болно. Праймерын хэт бага концентраци нь олшруулах бүтээгдэхүүний гарц бага байхад хүргэдэг бол хэт өндөр праймерын концентраци нь өвөрмөц бус олшруулалтанд илүү өртөмтгий байдаг. Ихэвчлэн загвар ДНХ -ийн хэмжээ том эсвэл нарийн төвөгтэй загвар ДНХ (хүний геномын ДНХ гэх мэт) загвар болгон ашигладаг бол праймерын концентраци бага байх ёстой. Загварын ДНХ -ийн хэмжээ бага эсвэл энгийн загвар ДНХ (жишээ нь, плазмидын ДНХ гэх мэт) -ийг загвар болгон ашиглах тохиолдолд праймерын концентраци илүү өндөр байх ёстой.
Бүх бүтээгдэхүүнийг ODM/OEM -д тохируулж болно. Дэлгэрэнгүй мэдээллийг,Customized Service (ODM/OEM) дээр дарна уу.
  |
1 кб фрагментийг олшруулахын тулд геномын ДНХ -ийг ашиглана уу. ПГУ -ын урвалын дараа электрофорез илрүүлэхийн тулд 5 мкл авна. |
A-1 загвар
■ Загвар нь уургийн хольц эсвэл Taq дарангуйлагч гэх мэтийг агуулдаг - ДНХ -ийн загварыг цэвэрлэж, уургийн хольцыг арилгаж эсвэл ДНХ -ийн загварыг цэвэршүүлэх хэрэгслээр гаргаж авна.
■ Загварын денатура нь дуусаагүй байна - —Денатурацийн температурыг зохих ёсоор нэмэгдүүлж, денатурацийн хугацааг уртасгана.
■ Загварын доройтол —- Загварыг дахин бэлдэх.
А-2 праймер
■ Праймерын чанар муу —— Праймерыг дахин нийлэгжүүлнэ.
■ Праймерын доройтол - Хадгалалт хийхийн тулд өндөр концентрацитай праймерыг бага хэмжээгээр хуваана. Олон удаа хөлдөх, гэсэхээс зайлсхийх, эсвэл 4 ° C-ийн температурт удаан хадгалах.
■ Праймерын зохисгүй дизайн (жишээлбэл, праймерын урт хангалтгүй, праймерын хооронд бүдгэрүүлэгч бий болсон гэх мэт) -Дахин дизайн хийх праймер (праймер болон хоёрдогч бүтэц үүсэхээс зайлсхийх)
А-3 мг2+төвлөрөл
■ Мг2+ концентраци хэт бага - Мг -ийг тогтмол нэмэгдүүлэх2+ концентраци: Mg -ийг оновчтой болгох2+ оновчтой Mg -ийг тодорхойлохын тулд 0.5мМ -ийн интервалтай 1мМ -ээс 3мМ хүртэлх урвалын цувралаар концентраци2+ загвар ба праймер бүрийн концентраци.
A-4 Шатаах температур
■ Өндөр халаах температур нь праймер ба загварыг холбоход нөлөөлдөг. —- Зуурах температурыг бууруулж, нөхцлийг 2 ° C градиентээр оновчтой болгоно.
A-5 Сунгах хугацаа
■ Богино сунгалтын хугацаа —— Сунгах хугацааг нэмэгдүүлэх.
Үзэгдэл: Сөрөг дээжүүд нь зорилтот дарааллын зурвасуудыг харуулдаг.
А-1 ПГУ-ын бохирдол
■ Зорилтот дараалал эсвэл олшруулах бүтээгдэхүүний хөндлөн бохирдол - Зорилтот дарааллыг агуулсан дээжийг сөрөг дээжинд пипеткээр оруулахгүй байх, эсвэл центрифугийн хоолойноос асгахгүй байх. Одоо байгаа нуклейн хүчлийг устгахын тулд урвалж буюу тоног төхөөрөмжийг автоклавт хийж, сөрөг нөлөөллийн туршилтаар бохирдол байгаа эсэхийг тодорхойлох шаардлагатай.
■ Урвалжийн бохирдол - Урвалжуудыг олшруулж, бага температурт хадгална.
A-2 Primer
■ Мг2+ концентраци хэт бага - Мг -ийг тогтмол нэмэгдүүлэх2+ концентраци: Mg -ийг оновчтой болгох2+ оновчтой Mg -ийг тодорхойлохын тулд 0.5мМ -ийн интервалтай 1мМ -ээс 3мМ хүртэлх урвалын цувралаар концентраци2+ загвар ба праймер бүрийн концентраци.
■ Праймерын зохисгүй дизайн, зорилтот дараалал нь зорилтот бус дараалалтай ижил төстэй шинж чанартай байдаг. —- Дахин дизайн хийх праймер.
Үзэгдлүүд: ПГУ-ын олшруулалтын зурвас нь хүлээгдэж буй хэмжээтэй нийцэхгүй байна, том эсвэл жижиг, эсвэл заримдаа тусгай өсгөлтийн болон өвөрмөц бус өсгөлтийн зурвас хоёулаа тохиолддог.
A-1 праймер
■ Праймерын өвөрмөц чанар муу
—- Дахин дизайн хийх праймер.
■ Праймерын концентраци хэт өндөр - денатурацийн температурыг зохих ёсоор нэмэгдүүлж, денатурацийн хугацааг уртасгадаг.
А-2 мг2+ төвлөрөл
■ Мг2+ концентраци хэт өндөр —— Mg2+ концентрацийг зохих ёсоор бууруулна: Mg -ийг оновчтой болгоно2+ оновчтой Mg -ийг тодорхойлохын тулд 0.5мМ -ийн интервалтай 1мМ -ээс 3мМ хүртэлх урвалын цувралаар концентраци2+ загвар ба праймер бүрийн концентраци.
А-3 Дулаан тэсвэртэй полимераза
■ Ферментийн хэт их хэмжээ - ферментийн хэмжээг 0.5 U интервалтайгаар зохих хэмжээгээр бууруулна.
A-4 Шатаах температур
■ Нэвчилтийн температур хэт бага байна.
А-5 ПГУ-ын мөчлөг
■ ПГУ -ын хэт олон мөчлөг - ПГУ -ын мөчлөгийн тоог багасгах.
A-1 праймер—— Муу чанар-Праймерын загварыг дахин боловсруулж, өвөрмөц байдлыг нь сайжруулахын тулд праймерын байрлал, уртыг өөрчлөх; эсвэл үүрлэсэн ПГУ хийх.
А-2 загвар ДНХ
—– Загвар нь цэвэр биш - Загварыг цэвэрлэж эсвэл ДНХ -ийг цэвэрлэх хэрэгслээр гаргаж авна.
А-3 мг2+ төвлөрөл
—-Мг2+ концентраци хэт өндөр - Мг -ийг тогтмол бууруулдаг2+ концентраци: Mg -ийг оновчтой болгох2+ оновчтой Mg -ийг тодорхойлохын тулд 0.5мМ -ийн интервалтай 1мМ -ээс 3мМ хүртэлх урвалын цувралаар концентраци2+ загвар ба праймер бүрийн концентраци.
A-4 dNTP
—DNTP -ийн концентраци хэт өндөр байна - dNTP -ийн концентрацийг зохих ёсоор бууруулна
A-5 Шатаах температур
—- Зуухлах температур маш бага ——Нухах температурыг зохих ёсоор нэмэгдүүлэх
А-6 мөчлөг
——Хэт олон мөчлөг ——Циклийн тоог оновчтой болгох
Эхний алхам бол тохиромжтой полимеразыг сонгох явдал юм. Тогтмол Taq полимераз нь 3'-5 'экзонуклеазын идэвх дутагдсаны улмаас шалгаж унших боломжгүй бөгөөд үл нийцэх байдал нь фрагментийн суналтын үр ашгийг ихээхэн бууруулдаг. Тиймээс ердийн Taq полимераз нь 5 кб -аас том хэмжээтэй зорилтот хэсгүүдийг үр дүнтэй өсгөж чадахгүй. Өргөтгөлийн үр ашгийг дээшлүүлэх, урт фрагментийг олшруулах хэрэгцээг хангахын тулд тусгай өөрчлөлттэй эсвэл өөр өндөр чанартай полимераз бүхий так полимеразыг сонгох шаардлагатай. Нэмж дурдахад урт фрагментийг олшруулахын тулд праймерын дизайн, денатурацийн хугацаа, сунгах хугацаа, буфер рН гэх мэтийг тохируулах шаардлагатай байдаг. Ихэвчлэн 18-24 даралттай праймер нь илүү сайн ургац авахад хүргэдэг. Загварын эвдрэлээс урьдчилан сэргийлэхийн тулд 94 ° C температурт денатурацийн хугацааг нэг мөчлөгт 30 секунд буюу түүнээс бага болгож, олшруулахаас өмнө температурыг 94 ° C хүртэл нэмэгдүүлэх хугацааг 1 минутаас бага байх ёстой. Түүгээр ч үл барам температурыг ойролцоогоор 68 0С -т тохируулж, сунгах хугацааг 1 кб/мин -ийн хурдаар төлөвлөх нь урт хэсгүүдийг үр дүнтэй олшруулах боломжийг олгодог.
ПГУ -ын олшруулалтын алдааны түвшинг өндөр нарийвчлалтай янз бүрийн ДНХ полимеразын тусламжтайгаар бууруулж болно. Одоогоор олсон бүх Taq DNA полимеразуудын дотроос Pfu фермент хамгийн бага алдааны түвшинтэй, хамгийн өндөр үнэнч байдаг (хавсаргасан хүснэгтийг үзнэ үү). Ферментийн сонголтоос гадна судлаачид урвалын нөхцлийг оновчтой болгох замаар ПГУ -ын мутацийн түвшинг бууруулах боломжтой бөгөөд үүнд буферийн найрлага, термостабол полимеразын концентраци, ПГУ -ын мөчлөгийн тоог оновчтой болгох зэрэг орно.
Бүтээгдэхүүний ангилал
ЯАГААД БИДНИЙГ СОНГОХ ВЭ
Манай үйлдвэр байгуулагдсанаасаа хойш энэхүү зарчмыг баримталж дэлхийн жишигт нийцсэн бүтээгдэхүүн үйлдвэрлэж байна
эхлээд чанарын. Манай бүтээгдэхүүнүүд нь салбартаа маш сайн нэр хүндтэй болж, хуучин болон хуучин хэрэглэгчдийн дунд үнэ цэнэтэй болсон.
- Утас: +86 010-59822688
- Бээжин, Чанпин дүүрэг, Шуаньингийн баруун зам, 86 тоот 5 -р байр.
- people@tiangen.com
